日本同仁CK04 cck-8試劑盒
日本同仁CK04 cck-8試劑盒,產(chǎn)品簡介:
產(chǎn)品品牌:同仁
產(chǎn)品名稱:cck-8試劑盒
英文名稱:Cell Counting Kit-8
產(chǎn)品貨號:CK04
產(chǎn)品規(guī)格:500t
日本同仁CK04 cck-8試劑盒,產(chǎn)品說明:
Cell Counting Kit-8 簡稱CCK-8試劑盒,為MTT法的替代方法,是一種基于WST(水溶性四唑鹽,化學(xué)名:2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽)的廣泛應(yīng)用于細胞增殖和細胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒??捎糜谒幬锖Y選、細胞增殖測定、細胞毒性測定、腫瘤藥敏等試驗
使用說明:
一、制作標準曲線(測定細胞具體數(shù)量時)
1
、先用細胞計數(shù)板計數(shù)所制備的細胞懸液中的細胞數(shù)量,然后接種細胞。
2
、按比例依次用培養(yǎng)基等比稀釋成一個細胞濃度梯度,一般要做3-5個細胞濃度梯度,每組3-6個復(fù)孔。
3
、接種后培養(yǎng)至細胞貼壁,然后加CCK-8試劑培養(yǎng)一定時間后測定OD 值,制作出一條以細胞數(shù)量為橫坐標(X 軸),OD 值為縱坐標(Y 軸)的標準曲線。根據(jù)此標準曲線可以測定出未知樣品的細胞數(shù)量(試用此標準曲線的前提是實驗的條件要一致,便于確定細胞的接種數(shù)量以及加入CCK-8后的培養(yǎng)時間。)
二、細胞活性檢測
1
、在96孔板中接種細胞懸液(100μL/孔)。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)(在37℃,5% CO2的條件下)。
2
、向每孔加入10μL CCK-8溶液(注意不要在孔中生成氣泡,它們會影響OD值的讀數(shù))。 3 4 5 1 2 3 4 5 6 A A A CCK-8
三、細胞增值-毒性檢測
活力計算:.
細胞活力(%)=[A(加藥)-A(空白)]/[ A(0加藥)-A(空白)]×100
細胞活力:細胞增殖活力或細胞毒性活力
注意事項:
①建議先做幾個孔摸索接種細胞的數(shù)量和加入CCK-8試劑后的培養(yǎng)時間。
②白細胞可能需要培養(yǎng)較長時間。
③當使用標準96 孔板時,貼壁細胞的最小接種量至少為1 ,000個/孔 (100 μL培養(yǎng)基)。檢測白細胞時的靈敏度相對較低,因此推薦接種量不低于2,500 個/孔 ( 100 μL培養(yǎng)基)。如果要使用24孔板或6孔板實驗,請先計算每孔相應(yīng)的接種量,并按照每孔培養(yǎng)基總體積的10% 加入CCK-8溶液。
④如果沒有450nm的濾光片,可以使用吸光度在430-490 nm 之間的濾光片,但是450nm檢測靈敏度最高。
⑤培養(yǎng)基中酚紅的吸光度可以在計算時,通過扣除空白孔中本底的吸光度而消去,因此不會對檢測造成影響。
細胞計數(shù)方法 MTT法 XTT 法 WST-1 法 CCK-8法
形成的formazan 的水溶性 差 好 好 好
產(chǎn)品性狀 粉末 2 瓶溶液 溶液 1瓶溶液
使用方法 配成溶液后使用 現(xiàn)配現(xiàn)用 無需預(yù)制 無需預(yù)制
檢測靈敏度 高 很高 很高 高
檢測時間 較長 較短 較短 最短
檢測波長 560-600nm 420-480nm 420-480nm 430-490nm
細胞毒性 高,細胞形態(tài)wanquan消失 很低,細胞形態(tài)不變 很低,細胞形態(tài)不變 很低,細胞形態(tài)不變
試劑穩(wěn)定性 一般 較差 一般 很好
大批量樣品檢測 可以 非常適合 非常適合 非常適合
便捷程度 一般 便捷 便捷 非常便捷