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QIAGEN試劑盒試驗(yàn)過程關(guān)鍵性的四步驟
更新時(shí)間:2015-12-14 點(diǎn)擊次數(shù):1958次
QIAGEN試劑盒操作過程看似簡單,但稍不注意都會影響到試驗(yàn)效果,QIAGEN試劑盒在試驗(yàn)過程中,關(guān)鍵的步驟有哪些呢?小編為您揭曉。
一、重要的洗滌
不充分的洗滌會導(dǎo)致差異和高背景,從而帶來不理想的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。如果未結(jié)合的材料殘留在微孔板中,那么它會增加背景噪音。有必要的話,可增加洗滌液中的鹽濃度,這會阻止非特異結(jié)合反應(yīng)。如果背景過高,懷疑洗滌不夠時(shí),可以嘗試增加洗滌次數(shù)。
二、QIAGEN試劑盒檢測試劑要適量
切勿使用過多的QIAGEN試劑盒。如果濃度過高,或者未正確稀釋,則會導(dǎo)致高背景。也不要顯色過度,如有必要,優(yōu)化一下何時(shí)應(yīng)加入終止液。
三、抗體濃度須優(yōu)化
如果試劑稍有不同,則可能需要優(yōu)化抗體的量。非特異的抗體結(jié)合會增加背景。為了防止這一點(diǎn),切勿使用過多的一抗或二抗。
四、關(guān)鍵的封閉
封閉液的作用是讓不相關(guān)的蛋白占據(jù)微孔板中潛在的結(jié)合位點(diǎn)。這就降低了可產(chǎn)生信號的抗體非特異結(jié)合的機(jī)會。如果背景過高,懷疑封閉不充分,那么可以嘗試使用更高濃度的封閉液,或適當(dāng)延長封閉時(shí)間。
目前主要有兩種類型的封閉液:蛋白和非離子型去污劑。使用的類型須取決于多個(gè)因素,包括微孔板的表面試劑、吸附的抗原、抗體和檢測試劑。好的封閉液應(yīng)降低非特異性結(jié)合,但它不應(yīng)當(dāng)與抗原、抗體或檢測試劑發(fā)生相互作用。
保證以上四個(gè)步驟不出錯(cuò),可以讓QIAGEN試劑盒發(fā)揮的作用。