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免疫血清的制備是常用的免疫學(xué)實驗技術(shù)
更新時間:2020-12-03 點擊次數(shù):1632次
免疫血清的制備是常用的免疫學(xué)實驗技術(shù)。高效價、高特異性的免疫血清可作為免疫學(xué)診斷的試劑(如用于制備免疫標(biāo)記抗體等),也可供特異性免疫治療用。
免疫血清的效價高低取決于實驗動物的免疫反應(yīng)性及抗原的免疫原性。如以免疫原性強的抗原刺激高應(yīng)答性的機體,常可獲得高效價的免疫血清。
而使用免疫原性弱的抗原免疫時,則需同時加用佐劑以增強抗原的免疫原性。免疫血清的特異性主要取決于免疫用抗原的純度。
因此,如欲獲得高特異性的免疫血清,必須予先純化抗原。此外,抗原的劑量、免疫途徑及注射抗原的時間間隔等,也是影響免疫血清效價的重要因素應(yīng)予重視。
原理
具有免疫原性的抗原可刺激機體相應(yīng)B細胞增殖、分化形成漿細胞并分泌特異性抗體。由于抗原分子表面的不同決定簇為不同特異性的B細胞克隆所識別,因此由某一抗原刺激機體后產(chǎn)生的抗體,實際上為針對該抗原分子表面不同決定簇的抗體混合物(即多克隆抗體)。
另外,抗體的產(chǎn)生具有回憶應(yīng)答的規(guī)律性,牨m現(xiàn)為初次免疫注射與再次免疫注射后的抗體應(yīng)答特點截然不同。是由于記憶性B細胞參與再次應(yīng)答所致。
免疫用的抗原必須經(jīng)FCA或FIA充分乳化后才能注射,否則將明顯影響抗原的免疫效果。上述制備乳化抗原的方法較費時、費力。采用H-81微型振蕩混合器法或三腔管研磨法制備。
前者是將抗原液與佐劑按比例混合后,置于混合器上使之劇烈振蕩(頻率2900轉(zhuǎn)/分,振幅6mm);后者是將免疫用的佐劑和抗原液按比例混合后,吸入注射器內(nèi)再將注射器連接于三腔管上反復(fù)抽吸研磨。這兩種方法約1小時即可使抗原充分乳化。