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Western blotting檢測試劑盒(ECL發(fā)光) NobleRyder P0960

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  • 價   格:
  • 更新時間:2024-08-28
  • 廠家性質(zhì):經(jīng)銷商

北京諾博萊德科技有限公司供應(yīng)Western blotting檢測試劑盒(ECL發(fā)光) NobleRyder P0960量大優(yōu)惠,咨詢 :

 

 

 Western blotting檢測試劑盒(ECL發(fā)光) NobleRyder P0960

 

 

北京諾博萊德科技有限公司供應(yīng)Western blotting檢測試劑盒(ECL發(fā)光) NobleRyder P0960量大優(yōu)惠,咨詢 :      1215878164

  

北京諾博萊德科技有限公司位于北京市海淀區(qū),是一家專業(yè)從事生化試劑、分子生物學(xué)試劑、實驗耗材及實驗儀器研發(fā)、銷售、服務(wù)為一體的生物科技公司,公司主要經(jīng)營的進口品牌包括Qiagen, Omega, Sigma, Invitrogen, Roche, Abcam, Santa cruz, FermantasMBI, NEB, BD, Peprotech, Abnova, R&D systerms, GE, Biovision, Millipore, Amresco, Merck, CST, Axygen, Corning, NUNC, Thermo fihser, Eppendorf等;產(chǎn)品涉及化工原料、生化試劑、分子克隆相關(guān)試劑、細胞培養(yǎng)及檢測常用試劑、實驗室常用耗材及儀器。

 

Western blotting檢測試劑盒(ECL發(fā)光) NobleRyder P0960

 

 

 

 

 

Western blotting ECL發(fā)光法檢測試劑盒

 

P1060

Western blotting(小鼠IgG)ECL發(fā)光法檢測試劑盒

860

P1070

Western blotting(兔IgG)ECL發(fā)光法檢測試劑盒

860

P1080

Western blotting(山羊IgG)ECL發(fā)光法檢測試劑盒

860

 

試劑盒內(nèi)容:
1. 封閉試劑:30g(可配制400ml)脫脂奶粉及其他蛋白,緩沖鹽等混合物。
2. 10倍濃縮抗體稀釋液,50ml。
3. HRP標(biāo)記二抗,0.1ml,效價12000-5000。
4. ECL顯色液,25mlA+25mlB。

試劑盒原理:
SDS-PAGE電泳后,蛋白質(zhì)按照分子量大小分離,轉(zhuǎn)移到固相載體(例如硝酸纖維素薄膜)后,固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質(zhì),以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原,與對應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng),再與酶標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng),加入發(fā)光底物后,能讓膠片感光。zui后經(jīng)顯影和定影后,可以在膠片上顯示出條帶來(抗原所在位置)。

操作步驟:
常規(guī)電泳轉(zhuǎn)膜后,
1. 清洗轉(zhuǎn)印膜:將膜剝離下后,作好標(biāo)記,一般在左上角剪一缺口。室溫用TBS-T漂洗3次每次5min,以盡量洗去轉(zhuǎn)印膜上的SDS,防止影響后面的抗體結(jié)合。
2. 5g封閉試劑加100ml雙蒸水計,配制膜封閉液,配好的膜封閉液為乳白色懸液,將漂洗過的轉(zhuǎn)印膜,封閉液內(nèi),搖床震動,室溫封閉30min。用TBS-T ,PH7.6洗液,室溫漂洗3次每次5min
3. 10×抗體稀釋液用雙蒸水稀釋成1×(10ml  10×抗體稀釋液加入90ml雙蒸水,混勻,可4℃保存三個月)。此稀釋液可作為一抗和二抗的稀釋液。
4. 1×的抗體稀釋液稀釋抗體。根據(jù)用量以及一抗的推薦稀釋濃度來稀釋一抗。將雜交膜放入雜交袋中,加入一抗工作液,封口,4℃孵育過液或37℃搖動孵育2h。此用過的抗體一般可回收第二天再使用一次。注:如果所加一抗不同,可在此步將膜沿電泳方向剪成條,分別作好標(biāo)記,分開孵育。
5. TBS-T ,PH7.6洗液,室溫漂洗3次每次5min。
6. 用稀釋好的抗體稀釋液稀釋二抗。根據(jù)用量,按10ml抗體稀釋液加入5ulHRP標(biāo)記二抗的比例,配制二抗工作液。將雜交膜放入雜交袋中,加入二抗工作液,封口, 37℃搖動孵育1h。此用過的抗體一般可回收第二天再使用一次。
7. TBS-T PH7.6洗液,室溫漂洗3次每次10min。
8. 配制ECL發(fā)光液:根據(jù)用量,取ECL發(fā)光液A、ECL發(fā)光液B各等量,混勻,加在膜正面,暗室顯色5分種。先傾去顯色液,再小心用紙吸去顯色液,在上面蓋一層平整的透明紙。再取出感光膠片,做好標(biāo)記,輕輕的放在膜上,請小心不要錯動(余下的膠片請收好)。顯色30S1分種,取出(直接上抬)膠片立即*浸入顯影液中1-2min,再丟入定影液中1分鐘,離開暗室,觀察結(jié)果,根據(jù)條帶強弱,可再次感光一次,并且減短或者加長感光時間(從5秒到30分鐘)以期達到理想結(jié)果。

注意事項:
1. 請根據(jù)一抗來源選擇試劑盒。而不是標(biāo)本來源來洗擇。因為二抗是與一抗反應(yīng)而不是與標(biāo)本反應(yīng)。
2. western blotting ECL發(fā)光法操作比較煩瑣,但其敏感性較高,對于低豐度蛋白也能顯示出結(jié)果。
3.可以根據(jù)顯色結(jié)果來優(yōu)化實驗反應(yīng)時間。如背景過深,可延長膜封閉時間,加長zui終漂洗次數(shù)與時間。如果條帶過弱,可增加抗體濃度,延長抗體孵育時間,加長感光時間。
4. TBS-T0.01M)配制方法:稱取NaCl 8.5g ,Tris 1.21g ,用800ml的雙蒸水溶解,用鹽酸調(diào)PH7.6,再加入0.5ml Tween20,用雙蒸水 加至1000ml,混勻即可。(也可按照自己的配制習(xí)慣來配制)
如果實驗結(jié)果無條帶,可將稀釋過的一抗再作1倍,10倍,50倍稀釋,直接點到膜上(10ul),封閉,加二抗,zui后顯色,如果能顯出斑點來,則證明顯色系統(tǒng)沒有問題,可從蛋白裂解和一抗上面找原因;如果無法顯出,請先從顯色系統(tǒng)尋找原因。

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