SYBR Green II(10000×) NobleRyder R0928
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SYBR Green II(10000×)
SYBR Green II RNA染料是一種高敏感的核酸染色試劑,可以對RNA或者是單鏈的DNA進(jìn)行染色。使用300nm透射光顯影的情況下,非變性凝膠中檢測核酸的靈敏度可以達(dá)到5×10-7克。與傳統(tǒng)的EB染料相比SYBR Green II RNA染料的靈敏度更高,可以應(yīng)用于雜交前RNA質(zhì)量的檢測,同時不會影響后續(xù)的轉(zhuǎn)膜,還可應(yīng)用于變形梯度凝膠電泳(DGGE)和單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析(SSCP)等實驗。SYBR Green II RNA染料可以代替銀染和EB染色,消除了銀染復(fù)雜、費時的缺點;與EB染色相比,形成的SRBR Green II -RNA復(fù)合物所激發(fā)的熒光是EB-RNA復(fù)合物激發(fā)熒光的7倍。SYBR Green II RNA染料并不是特異性的結(jié)合RNA或者DNA單鏈,但是其對單鏈的結(jié)合效率是雙鏈的約2倍,廣泛的應(yīng)用于RNA的質(zhì)量分析中。
染色方法:
SYBR Green II RNA 染料檢測核酸時即可預(yù)染也可以電泳后再進(jìn)行染色。做預(yù)染使用時,取1ul貯存液加入1ml TE緩沖液或者滅菌雙蒸水中混勻,再加入1ml 的6-loading buffer上樣緩沖液混勻(此時溶液為1:2000稀釋,即為工作液)電泳時取1-2ul工作液和5ul電泳樣品混勻后直接上樣。注意:須將商品化的核酸MARKER作一定倍數(shù)的稀釋(1/5-1/10),這樣才能得到比較理想的結(jié)果。
電泳后染色。電泳后,在室溫、避光的情況之下準(zhǔn)備染色液。染色液要在塑料器皿中制備而不要在玻璃器皿中,因為玻璃表層對該試劑有吸附作用。
染料取出后室溫放置,恢復(fù)室溫后簡單離心混勻。
染色液使用1×TBE緩沖液進(jìn)行1:10,000稀釋。如果是瓊脂糖甲醛變性膠,用1×TBE做1:5,000的稀釋。由于SYBR Green II RNA染色液靈敏度高,所以要選用新鮮的1×TBE緩沖液進(jìn)行稀釋,以免緩沖液中殘存的雜質(zhì)產(chǎn)生背景,影響實驗結(jié)果。注意:為了提高染色的靈敏度,要確定緩沖液的PH值在7.5和8之間,因為SYBR Green II RNA染色液對PH敏感。
把膠放在塑料的染色容器中,加入足夠染色液使之覆蓋整塊膠。用鋁箔遮蓋或者是放在暗處避光。在染色之前沒有必要先將膠中的變性劑如尿素和甲醛洗出來,因為SYBR Green II RNA染色液復(fù)合物發(fā)出的熒光在甲醛或者尿素存在時不會猝滅。
在室溫下輕輕搖晃凝膠。聚丙烯酰胺凝膠的*染色時間是10-40分鐘,瓊脂糖凝膠的*染色時間是20-40分鐘。染色時間也可能隨著凝膠的厚度和濃度變化。由于其熒光本底很低,凝膠染色后無需脫色。染色工作放在2-8°C避光保存,可以重復(fù)使用3-4次。注意:SYBR Green II RNA染色液不影響RNA向膜上的轉(zhuǎn)移和northern中的后續(xù)實驗。
染色膠顯色和成像:SYBR Green II RNA染色液復(fù)合物所激發(fā)的熒光可以使用300nm和254nm光波照射,通過Wratten 15 濾光片檢測。注意:由于熒光本底較低,所以可以通過適當(dāng)延長曝光時間的方法檢測痕量的核酸。
請帶手套操作。
貯存
SYBR Green II RNA染色液保存于DMSO溶液中,此貯存液于保存溫度為-20°C,放置于避光干燥器中,在以上條件下,可在保存一年。稀釋工作液在2-8°C可以放置一周,在室溫放置3-4天。
北京諾博萊德科技有限公司位于北京市海淀區(qū),是一家專業(yè)從事生化試劑、分子生物學(xué)試劑、實驗耗材及實驗儀器研發(fā)、銷售、服務(wù)為一體的生物科技公司,公司主要經(jīng)營的進(jìn)口品牌包括Qiagen, Omega, Sigma, Invitrogen, Roche, Abcam, Santa cruz, Fermantas(MBI), NEB, BD, Peprotech, Abnova, R&D systerms, GE, Biovision, Millipore, Amresco, Merck, CST, Axygen, Corning, NUNC, Thermo fihser, Eppendorf等;產(chǎn)品涉及化工原料、生化試劑、分子克隆相關(guān)試劑、細(xì)胞培養(yǎng)及檢測常用試劑、實驗室常用耗材及儀器。
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